基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU，argW，ileX，glyT，leuW，proL)(CamR)

簡要說明

Rosetta(DE3) 感受態細胞具有lu霉素抗性，補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA，AGG， AGA， CUA，CCC，GGA) 對應的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平，該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區（DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶），同時表達T7RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。Rosetta(DE3)感受態細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率高達108cfu/μg。

操作說明

1、取100μl冰上融化的 Rosetta(DE3)感受態細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT 或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項

1、感受態細胞最好在冰上融化。

2.混入質粒時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

4.誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。